促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟

【資料簡(jiǎn)介】

促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟【成份】

［藥盒組成及配制］ 50管 100管 200管

1.碘[¹²⁵I]-LH(紅) 1瓶 1瓶 2瓶

2.LH校準(zhǔn)品 1套 1套 1套

LH校準(zhǔn)品(7瓶/套)濃度分別為：(0、5、10、25、50、100、200)mIU/mL。

3.LH抗體(蘭) 1瓶 1瓶 2瓶

4.質(zhì)量控制樣品 1套 1套 1套

5.分離試劑 1瓶 1瓶 2瓶

6.藥盒使用說明書 1張 1張 1張

促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟［操作方法］

1.樣品采集：取全血，分離血清，備用。(2～8)℃放置可保存2周；若冰凍保存，可放置五周。脂血或溶血樣品影響測(cè)定結(jié)果。

2.實(shí)驗(yàn)方法：試管編號(hào)，按下表程序操作。

操作表 單位：μL

管別	校準(zhǔn)品	樣品	蒸餾水	抗體	125I-LH	混勻，室溫放置(12～16)小時(shí)。	分離劑
總T管	--	--	--	--	100		--
NSB管	200(S0)	--	100	--	100		500
S0管	100	--	--	100	100		500
S1管～S末管	100	--	--	100	100		500
血樣品管	--	100	--	100	100		500

混勻，室溫放置15分鐘，離心(3500轉(zhuǎn)/分)15分鐘，吸棄上清液，在放免儀上測(cè)定各管沉淀的放射性計(jì)數(shù)(cpm)。

［數(shù)據(jù)處理］

1.計(jì)算機(jī)處理：建議采用“對(duì)數(shù)計(jì)量-相對(duì)結(jié)合率的分?jǐn)?shù)對(duì)數(shù)”〔log(dose)～logit(B_i/B₀)〕數(shù)學(xué)模型或四參數(shù)數(shù)學(xué)模型擬合。

2.計(jì)算、繪圖法：

計(jì)算各管的百分結(jié)合率：以S₀(cpm數(shù))為B₀，各校準(zhǔn)管S_i(cpm數(shù))為B_i，求各管的百分結(jié)合率。

 

⑴.線性回歸：用logX～logitY回歸，求出r、a、b值，樣品含量可由下式計(jì)算得出。

 

⑵.繪圖法：用各校準(zhǔn)點(diǎn)計(jì)算的結(jié)果，在log～logit坐標(biāo)紙上繪制校準(zhǔn)曲線圖，被測(cè)樣品的含量可根據(jù)B_i/B₀的百分結(jié)合率從校準(zhǔn)曲線圖上查出。

［正常參考值］

各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/span>建立自己的動(dòng)物參考值。

［技術(shù)特性］

1.靈敏度：＜0.3mIU/mL

2.測(cè)定范圍：(5～200)mIU/mL

3.精密性：批內(nèi)變異系數(shù)CVw＜10％，批間變異系數(shù)CVb＜15％。

［參考文獻(xiàn)］

1.Bremnerw J:PituifaryPonadotropinsans their dosorders,Principles of endocinodosy and metabolism KL 1990,pp152-6.

2.Wu CH:Monitoring of oradation induction Fertilsteril 30:617,1978.

【性狀】

液體組份應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物。

【放射性核素半衰期】

放射性核素碘[¹²⁵I]半衰期(T_1/2)=60天

促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟【適應(yīng)癥】

［測(cè)定原理］

本藥盒是利用放射免疫分析方法進(jìn)行測(cè)定的。在均相競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)中采用平衡法，對(duì)血清樣品中LH的含量進(jìn)行直接測(cè)定。測(cè)定中校準(zhǔn)品、樣品等中的LH與¹²⁵I-LH競(jìng)爭(zhēng)*的LH抗體結(jié)合位。當(dāng)被測(cè)樣品中LH的含量高時(shí)，剩余的抗體結(jié)合位就少，從而與抗體結(jié)合的¹²⁵I-LH就少，反之亦然。利用分離試劑分離出抗原-抗體復(fù)合物，并測(cè)定復(fù)合物中的放射性計(jì)數(shù)。¹²⁵I-LH的結(jié)合量與樣品中LH的含量呈函數(shù)關(guān)系，通過數(shù)據(jù)處理可求出樣品中LH的含量。

［臨床意義］

促黃體生長(zhǎng)激素(LH）是由垂體前葉分泌的糖蛋白激素，其分子量大約為30000，由兩條多肽鏈（即α和β亞單位）組成。LH的α亞單位與FSH、LH和HCG的亞單位的結(jié)構(gòu)相似。β亞單位在上述激素之間是不同的，從而賦予各激素各自的生物及免疫學(xué)特性。在雌性體中，LH在卵泡期限與FSH一起促進(jìn)卵泡的成熟、雌性激素的合成和分泌；促進(jìn)排卵和使排卵后的卵泡轉(zhuǎn)變?yōu)辄S體；促進(jìn)間質(zhì)的生長(zhǎng)；并促進(jìn)黃體合成和孕激素與雌性激素的分泌。雄性LH促進(jìn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞增生，促進(jìn)其合成和分泌睪丸酮。由于LH和FSH的作用是互相協(xié)同的故二者常同時(shí)測(cè)定。LH增高見于Klinefelter綜合癥、Turner綜合癥、性腺切除后及促性腺激素產(chǎn)生腫瘤；減低見于西蒙氏病、席漢氏綜合癥、肥胖性生殖器退化綜合癥、垂體性侏儒、睪丸腫瘤、卵巢腫瘤、神經(jīng)性厭食及使用雌激素后。

 

【注意事項(xiàng)】

1.所有試劑包括待測(cè)樣品實(shí)驗(yàn)前應(yīng)事先在室溫下平衡20分鐘，且使用前應(yīng)充分搖勻。

2.不同批試劑不能混合使用，每份樣品都應(yīng)做雙管實(shí)驗(yàn)。

3.本實(shí)驗(yàn)使用放射性核素碘[¹²⁵I](劑量為0.2μCi/mL)，故應(yīng)注意放射防護(hù)。放射性廢物須按放射防護(hù)條例規(guī)定處理。

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