植物花青苷ELISA 檢測試劑盒 使用說明書-南京草本源

【資料簡介】

本 試 劑 盒 只 能 用 于 科 學 研 究 ， 不 得 用 于 醫 學 診 斷
植物（Plant）花青苷（Anthocyanin）
ELISA 檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被花青苷（Anthocyanin）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的花青苷（Anthocyanin）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行
3. 植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。
4. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍，zui終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻
試劑盒組成
名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無 標準品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無 * 6mL 3mL 無 檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無 20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋 底物 A 6mL 3mL 無 底物 B 6mL 3mL 無 終止液 6mL 3mL 無 封板膜 2 張 2 張 無 說明書 1 份 1 份 無 自封袋 1 個 1 個 無 注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、10、20、40、80、160 mg/L
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL，再加* 40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的
結果判斷
繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于 1.0 mg/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
 

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