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檢測銅綠假單胞菌對化妝品的影響的六大步驟
2013-9-26 閱讀(884)
銅綠假單胞菌在化妝品中指綠膿桿菌，綠膿桿菌對人有致病力，可以致傷處化膿，導致敗血癥等。
銅綠假單胞菌檢測方法如下：
1.增菌培養：取10mL1:10樣品稀釋液加到90mLSCDLP液體培養基中，放置于37℃培養18h～24h。如果有綠膿桿菌生長，培養液表面會出現一層薄菌膜，培養液通常會呈現黃綠色或藍綠色。
2.分離培養：從培養液的薄膜處挑取培養物，劃線接種在十六烷基*基溴化銨瓊脂平板上，放置于37℃培養18h～24h。若綠膿桿菌在此培養基上，其菌落扁平無定型，向周邊擴散或略有蔓延，表面濕潤，菌落變成灰白色，菌落周圍培養基擴散有水溶性色素，這種培養基選擇性較強，在此培養基中大腸艾希氏菌不能生長，革蘭氏陽性菌生長較差。
如果沒有十六烷基*基溴化銨培養基的話，也可以選擇使用乙酰胺培養基進行分離，將菌液劃線接種到平板上，置于37℃培養24h，綠膿桿菌在該培養基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整齊，菌落周圍培養基帶有些許粉紅色，其它菌沒有生長。
3.染色鏡檢：選擇可疑的菌落，涂片，用革蘭氏染色，鏡檢結果為革蘭氏陰性的應該進行氧化酶試驗。
4.氧化酶試驗：取一小塊干凈的白色濾紙片放于滅菌平皿中，用無菌玻璃棒取綠膿桿菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試劑，如果在15s～30s之內，菌落出現粉紅色或紫紅色，則為氧化酶試驗陽性；如果培養物不變色，則為氧化酶試驗陰性。
5.綠膿菌素試驗：選取可疑菌落2～3個，分別接種在綠膿菌素測定培養基上，放在37℃培養24h，加入氯仿3mL至5mL，充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于氯仿液內，待氯仿提取液呈藍色時，用吸管將氯仿移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL左右，振蕩后，靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時為陽性，表示被檢物中有綠膿菌素存在。
6.硝酸鹽還原產氣試驗：挑取可疑的綠膿桿菌純培養物，接種在硝酸鹽蛋白胨水培養基中，置37℃培養24h，觀察結果。凡在硝酸鹽蛋白胨水培養基內的小倒管中有氣體者，即為陽性，表明該菌能還原硝酸鹽，并將亞硝酸鹽分解產生氮氣。
7.明膠液化試驗，取綠膿桿菌可疑菌落的純培養物，穿刺接種在明膠培養基內，置37℃培養24h，取出放冰箱10min～30min，如仍呈溶解狀時即為明膠液化試驗陽性；如凝固不溶者為陰性。
8.42℃生長試驗：挑取可疑的綠膿桿菌純培養物，接種在普通瓊脂斜面培養基上，放在41～42℃培養箱中，培養24h～48h，綠膿桿菌能生長，為陽性，而近似的熒光假單胞菌則不能生長。
銅綠假單胞菌檢驗結果分析：
被檢樣品經增菌分離培養后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長，經證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，就可報告被檢樣品中檢測出綠膿桿菌；如果綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。
