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酶聯免疫吸附實驗(ELISA)自1971年自問世以來,以其敏感性高,特異性強,操作簡潔、安全,而廣泛使用于臨床確診,創始了免疫學確診的新。但同其它免疫確診辦法一樣酶免試劑在它的研討、生產及運用中常常會碰到非特異性問題。
1、試劑盒特異性要素
1、1 固相載體的挑選。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見[1]。它具有良好的吸附功能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間功能附近。聚苯乙烯ELISA板因為原料的不同和制作工藝的差別,各產品的質量差異很大。因而,在挑選試劑盒一起要對其運用的微孔板類型進行認證,評估。
1、2包被物的純度。在酶聯免疫測定尤其是直接ELISA中,試劑的特異性取決于運用抗原的純度。目前因為技術條件的約束,包被用抗原或抗體的純度不可能到達100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能進步純度,進步特異性。目前運用的包被抗原一般為合成多肽抗原。
1、3包被抗體的效價。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決議試劑特異性的重要方面。
1、4 關閉。是ELISA中重要的一步,目的是關閉固相載體外表尚未被所占有的空地[2],減少后續過程中非特異性蛋白的干擾。
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