一、ELISA的原理
ELISA的根底是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶符號。結合在固相載體外表的抗原或抗體仍堅持其免疫學活性，酶符號的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測守時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體外表的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分隔。再加入酶符號的抗原或抗體，也經過反響而結合在固相載體上。此刻固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的份額。加入酶反響的底物后，底物被酶催化成為有色產品，產品的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可依據呈色的深淺進行定性或定量分析。因為酶的催化功率很高，間接地擴大了免疫反響的結果，使測定辦法達到很高的敏感度。
 

二、ELISA的類型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定辦法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶符號的抗原或抗體，稱為"結合物"（conjugate）；（3）酶反響的底物。依據試劑的來歷和標本的狀況以及檢測的具體條件，可規劃出各種不同類型的檢測辦法。用于臨床查驗的ELISA主要有以下幾種類型：
 

1.雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的辦法，操作過程如下：
1）將特異性抗體與固相載體聯合，構成固相抗體。洗刷除掉未結合的抗體及雜質。
2）加受檢標本，保溫反響。標本中的抗原與固相抗體結合，構成固相抗原抗體復合物。洗刷除掉其他未結合物質。
3）加酶標抗體，保溫反響。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗刷未結合的酶標抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產品。經過比色，測知標本中抗原的量。
 

2.雙抗原夾心法測抗體
反響形式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因而其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常選用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備，應依據抗原結構的不同，尋找適宜的符號辦法。
 

3.間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的辦法。其原理為使用酶符號的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測與固相抗原結合的受檢抗體。
 

4.競賽法測抗體
當抗原材猜中的攪擾物質不易除掉，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競賽與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因而陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。

如抗原中會有攪擾物質，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然后加入抗原，構成固相抗原。洗刷除掉抗原中的雜質，然后再加標本和酶標抗體進行競賽結合反響。競賽法測抗體有多種形式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競賽結合，抗HBc ELISA一般選用此法。另一種形式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競賽結合，洗刷后再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反響?？笻Be的檢測一般選用此法。
 

5.競賽法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競賽與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
 

6.捕獲包被法測抗體
IgM抗體的檢測用于流行癥的前期確診中。間接法ELISA一般僅適用于檢測總抗體或IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體，因標本中一般同時存在較高濃度的IgG抗體，后者將競賽結合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結合到固相上。因而如用抗人IgM作為二抗，間接測定IgM抗體，必須先將標本用A蛋白或抗IgG抗體處理，以除掉IgG的攪擾。

在臨床查驗中測定抗體IgM時多選用捕獲包被法。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶符號針對抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的前期確診。甲型肝炎病毒（HAV）抗體的檢測形式見圖2-7。類風濕因子（RF）同樣能攪擾捕獲包被法測定IgM抗體，導致假陽性反響。因而中和IgG的間接法近來頗受青睞，用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
 

7.ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)體系(system)的略語。親和素是一種糖蛋白，分子量60000，每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成。生物素為小分子化合物，分子量244。用化學辦法制成的衍生物素- 羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子構成生物素符號產品，符號辦法較為簡潔。生物素與親和素的結合具有很強的特異性，其親和力較抗原抗體反響大得多，兩者一經結合就極為安穩。因為一個親和素可與 4個生物素分子結合，因而如把ABS與ELISA法可分為酶符號親和素-生物素（LAB）法和橋聯親和素-生物素（ABC）法兩種類型。

兩者均以生物素符號的抗體（或抗原）代替原ELISA體系中的酶標抗體（抗原）。在LAB 中，固相生物素先與不符號的親和素反響，然后再加酶符號的生物素以進一步進步敏感度。在前期，親和素從蛋清中提取，這種卵親和素為堿性糖蛋白，與聚苯乙烯載體的吸附性很強，用于ELISA中可使本底增高。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點，在ELISA使用中有替代前者的趨勢。因為ABS-ELISA較一般ELISA多用了兩種試劑，增加了操作過程，在臨床查驗中ABS-ELISA使用不多。