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采用化學標記和MALDI MSn質譜分析法進行多糖結構分析

閱讀:4264      發布時間:2018-1-4
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摘要

背景:

人體中,多糖在糖蛋白的功能中起著重要作用。目前,由于多糖分析程序消耗時間和勞動,詳細的結構分析非常具有挑戰性,通常涉及多步驟序列處理、HPLC或電泳提純、以及質譜分析。

方法:

在此項研究中,采用了一臺AXIMA-Resonance?儀器來生成MALDI-IT-TOF- MSn譜圖,以便在無需多步驟分離或酶處理條件下進行多糖序列分析。我們采用了MSn質譜分析法來監控多糖的氧化。

結果:

MSn數據表明,溫和的氧化條件可特異性氧化唾液酸。結合碳水化合物氧化反應和MSn分析結果,我們能夠監控唾液酸化的氧化反應和寡糖的連接。

1.方法和結果

1. 多糖氧化示意圖

2. 多糖和糖蛋白高度特異性分析的質譜分析法示意圖

 

 

 

1. 四種寡糖G1-G4及其氧化產物的質荷比。

MS譜圖顯示了不同氧化條件下的反應產物。

采用MSn檢測來監控氧化反應條件

 3. MS譜圖顯示了不同氧化條件下的反應產物

 

 

 

                       片段峰的擴大

4. 采用MS識別13371339的多糖結構

 

5采用MSn氧化聚糖檢測技術識別的聚糖和氧化產物結構列表

 

 

 

總結

  • 溫和氧化條件能夠特異性氧化碳水化合物鏈末端的唾液酸基團。因此,可以測定唾液酸化的多糖。

  • MSn分析能夠在無需標記和糖苷酶處理條件下檢測多糖構成和序列信息。

  • MSn數據能夠指明氧化位點以及多糖的連接。

 

參考文獻

 

  1. Zhang H, Li XJ, Martin DB, Aebersold R.Nat Biotechnol.2003, 21(6), 660-666.

  2. Tian Y, Zhou Y, Elliott S, Aebersold R, Zhang H. Nat Protoc.2007, 2(2), 334-339.

  3. Van Lenten L. and Ashwell.J. G. Biol.Chem.1971, 246, 18891894

 

 

 

 

 

 

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