經(jīng)驗總結

    經(jīng)過一段時間的瀏覽和學習，從一些在論壇內學習、請教，并結合實踐操作，我經(jīng)歷了初級——查找資料和摸索方法；中級——問題求助和不斷總結；——難題解答和經(jīng)驗分享這三個階段，也學到了不少知識，積累了很多寶貴經(jīng)驗，與大家一起分享下。

實驗為例

    從我接觸的很多本科生和研究生中發(fā)現(xiàn)，他們的確是免疫組化“新手"，他們只注重如何做和zui終的結果，但對為什么這樣做不太感興趣。他們常按照網(wǎng)上所說的方法，摸索好的抗體濃度和條件后做出很漂亮的染色結果后，他們就認為自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法了，結果不求上進，更換一種新抗體后或實驗出現(xiàn)異常結果后就很難做出來了。當然，免疫組化對于我來說，做過很多，但也不能說什么都會，只不過我做的多了，失敗多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的訣竅，拿來與大家進行分享。此外，我個人經(jīng)驗不可能面面俱到，還需要更多有經(jīng)驗的高手一起分享、糾正和補充。在這里，我需要感謝中華病理網(wǎng)、丁香通、小木蟲論壇給我很大的幫助，還有上海舜田生物技術人員老師給我實驗很多指導和幫助，讓我受益匪淺。

免疫個人感悟

    1、其實免疫組化，我個人感覺方法和操作都不是很難，關鍵是結果出現(xiàn)異常時該如何去解決？我認為首先需要掌握好免疫組化實驗的原理，知道每一個操作步驟的目的，這樣你才能大膽地去改革和糾正一些錯誤的步驟，如抗體孵育條件主要是抗體濃度、溫度、時間，這三者一般是相互成反比的（相對），其中濃度是zui重要的先決條件，溫度決定反應的速度、時間決定反應的量。比如溫度有4℃、室溫、37℃。我推薦4℃*，反應zui溫和，背景較淺；而37℃反應速度較快，時間較短；室溫我不太提倡，除非你每次都把環(huán)境溫度控制在一定的范圍，否則，盡量選擇前兩者。

    2、定位和定性是免疫組化zui大的優(yōu)勢。相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高，是定位檢測分析方法。尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。

    3、免疫組化結果定量分析的前提是高質量的染色切片。免疫組化結果也能定量分析，但必須是背景染色淺而特異性染色較深的情況下，分析zui為準確，這種原則可能也是我們日常審稿時判定研究結果的*條件。

    4、免疫組化實驗一定要設置陽性和陰性對照。陽性對照一般是用肯定表達這種抗原的切片來做；陰性對照一般是用PBS或非一抗替代一抗來進行反應，其余步驟均一致。前者是排除方法和實驗系統(tǒng)有無問題；后者是排除有無一抗外的非特異性染色。

    5、免疫組化技術掌握與否的鑒定標準是同一切片或不同切片中不同抗原均從摸索濃度或條件而做出優(yōu)良的染色切片。我發(fā)現(xiàn)許多研究生把網(wǎng)上或者說明書摸索的反應條件、濃度、方法步驟，重復運用于同一性質的切片和同一種抗體，做出來后就覺得自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法，更換一種抗體后，居然連二抗的種屬來源都拿錯了。失敗往往促進你去思考試驗原理和過程，成功有時也讓自己很自傲。

    6、免疫組化的應用廣泛，是當前實驗研究的zui重要方法之一。如今發(fā)SCI論文時，明顯感覺僅靠量化的數(shù)據(jù)來發(fā)文章很難，加一些形態(tài)學數(shù)據(jù)或圖片，老外十分歡迎，可能是怕你學術造假吧。當然也不能做假陽性或假陰性結果。

    7、實驗方法需要動手和動腦。經(jīng)過了反復的動手和動腦，把理論原理運用于實踐，在把實踐中發(fā)現(xiàn)的問題帶到理論知識中去解決，zui終把理論與實踐融會貫通。必要時去各大論壇或者一些公司尋求幫助，個人感覺上海舜田生物不錯，服務質量也很好。