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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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ELISA試劑盒
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介紹HIV測定大鼠elisa檢測試劑盒操作規(guī)程

時間:2017-10-27閱讀:284
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1、大鼠elisa檢測試劑盒檢驗?zāi)康?br />    應(yīng)用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法原理(ELISA)定性檢測人血清、血漿標本中的HIV(1+2)型抗體的測定,用于HIV感染的輔助診斷,抗HIV藥物治療的效果的
2、原理
采用夾心ELISA方法檢測血清或血漿標本中人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體,預(yù)包被高純度基因重組HIV(1+2)型抗原,可與標本中的抗-HIV抗體反應(yīng),加入HRP標記HIV(1+2)型抗體抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物,然后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。通過酶標儀檢測吸光度(OD值),根據(jù)OD值判斷HIV抗體的存在與否。
3、性能參數(shù)
靈敏度高(0.5ng/ml)
4、標本要求
  (1)標本類型:血清,血漿。
(2)標本采集:見標本采集手冊
(3)標本儲存和運輸:室溫放置不超過8小時,2-8℃不超過72小時,-20℃可*保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融
(4)標本拒收狀態(tài):細菌污染,嚴重溶血或脂血標本不能作測定。
5、容器和添加劑類型
6、試劑
(1)試劑名稱:人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體診斷試劑盒。
(2)試劑生產(chǎn)廠家:北京萬泰生物藥業(yè)有限公司
(3)包裝規(guī)格:96T/Kit
(4)試劑盒組成:①、HIV酶標板;②、HIV酶標試劑;③、HIV(1+2)型陽性及陰性對照血清;④、顯色劑A液和B液;⑤、此外還有濃縮洗滌液、終止液、自封袋、封板膜、說明書等。人ELISA試劑盒
7、儀器設(shè)備:
酶標儀:ZS板式,北京普朗生物技術(shù)有限公司,每年由計量單位進行一次校準。
洗板機:DNM-9620型,北京普朗生物技術(shù)有限公司,每年由國家計量單位進行一次校準。
移液器:上海求精,每年由國家計量單位進行一次校準。
8、校準程序 
送xx市計量檢測所校準
9、操作步驟
①、配液:將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。
②、編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板設(shè)陰性對照3孔、陽性對照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白對照1孔。人ELISA試劑盒
③、加樣:分別在相應(yīng)孔加入待檢標本、陰性、陽性對照100μl,用封板膜封板后置37℃溫育30min。人ELISA試劑盒
④、洗滌:小心把封板膜揭去,用洗板機選擇5次程序,洗板后拍干。
⑤、加酶:每孔加酶結(jié)合物100μl(空白對照孔除外),充分混勻,用封板膜封板后置37℃溫育30min。
   ⑥、洗滌:小心把封板膜揭去,用洗板機選擇5次程序,洗板后拍干。。
   ⑦、顯色:每孔加入顯色劑A液和B液各50μl,輕輕振蕩混勻,封板后置37℃避光顯色15min。
   ⑧、測定:每孔加終止液50μl,輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標儀比色,參考波長630 nm),空白調(diào)零,讀取各孔OD值。
⑨、判斷結(jié)果:計算臨界值(cut-off)(CO)值。
臨界值=陰性對照A均值+0.12
正常情況下,陰性對照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對照的OD值>0.1應(yīng)舍棄,若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.1,應(yīng)重復(fù)實驗。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。
   大鼠elisa檢測試劑盒正常情況下,陽性對照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對照的OD值<0.8應(yīng)舍棄,若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實驗。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。
注意:對于篩查陽性標本,應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試,復(fù)試陽性者應(yīng)按照《全國*管理規(guī)范》送HIV確證實驗室進行確證試驗。
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大鼠elisa檢測試劑盒

 

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