牛堿性成纖維細胞生長因子(FGF2) ELISA試劑盒需自備的設備及試劑:
1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱);
2. 單道或多道微量加液器及吸頭;
3. 稀釋樣品的EP管;
4. 蒸餾水或去離子水;
5. 吸水紙;
6. 盛放洗液的容器。
牛堿性成纖維細胞生長因子(FGF2) ELISA試劑盒常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等的處理方式
1、血液包括血漿和血清,它們的主要區別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存備用;
1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存備用;
2、胃液和唾液的采集方式一般現采現用,但是一般飯后半小時內不易采集,因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時間時空腹采集;
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現采現用,但是一般隔夜尿不采集;
4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmp x 5min,取上清,-20℃或4℃保存備用;
牛堿性成纖維細胞生長因子(FGF2) ELISA試劑盒操作步驟
1. 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內進行。
2. 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液;(不含空白對照孔)
6. 將酶標板用封口膠密封后,37℃孵育反應 1小時;(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干;
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應15分鐘;
11.各孔加入50μl終止液,終止反應;
結果判斷
1. 30分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;
2. 以OD值為縱坐標,以標準品的濃度為橫坐標,繪制曲線圖;
3. 根據樣品的OD值查找對應的濃度范圍;
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