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天凈沙Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒

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天凈沙Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒血液樣品和各種臨床樣品（包括組織檢查、FFPE切片或少量細(xì)胞樣品）都是基因表達(dá)分析和診斷的常見(jiàn)材料，但這些樣品通常數(shù)量有限，質(zhì)量不高，并且還沒(méi)法進(jìn)行第二次取樣。所以得到足夠RNA量供后續(xù)試驗(yàn)是一個(gè)非常棘手的瓶頸。為解決這一問(wèn)題，本公司根據(jù)Ribo-SPIA技術(shù)，開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。Ribo-SPIA技術(shù)的核心是利用DNA/RNA嵌合引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄并得到雙鏈cD

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天凈沙Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
天凈沙Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒	20次	4900元

血液樣品和各種臨床樣品（包括組織檢查、FFPE切片或少量細(xì)胞樣品）都是基因表達(dá)分析和診斷的常見(jiàn)材料，但這些樣品通常數(shù)量有限，質(zhì)量不高，并且還沒(méi)法進(jìn)行第二次取樣。所以得到足夠RNA量供后續(xù)試驗(yàn)是一個(gè)非常棘手的瓶頸。為解決這一問(wèn)題，本公司根據(jù)Ribo-SPIA技術(shù)，開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。Ribo-SPIA技術(shù)的核心是利用DNA/RNA嵌合引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄并得到雙鏈cDNA、RNase H不間斷地在cDNA第1鏈中的RNA部分產(chǎn)生裂口，DNA聚合酶以此裂口為基礎(chǔ)進(jìn)行鏈取代聚合反應(yīng)，產(chǎn)生cDNA單鏈。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 高效，能線性擴(kuò)增1500-2000倍，能用5-50 ng總RNA模板擴(kuò)增得到mg級(jí)的高純度cDNA。

2. 步驟簡(jiǎn)單方便，擴(kuò)增在恒溫進(jìn)行，只需要4個(gè)小時(shí)，不需要特殊儀器設(shè)備。

3. 保真性好，保持RNA樣品中各分子的相對(duì)豐度。

4. 尤其適用于RNA產(chǎn)量和質(zhì)量都不高的樣品。

5. 擴(kuò)增得到的cDNA能直接用于各種后續(xù)試驗(yàn)，包括qPCR、芯片分析、雜交反應(yīng)等。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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