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上海博湖生物科技有限公司
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細(xì)胞冷凍蝕刻復(fù)型技術(shù)應(yīng)用結(jié)果
2019-12-27 閱讀(2038)
細(xì)胞應(yīng)用結(jié)果
細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層被劈分開(kāi)以后，其外層的內(nèi)表面稱胞質(zhì)外面或E面(extracellular face, E face);其內(nèi)層的外表面稱胞質(zhì)面或P面(plasmic face, P face)。P面常見(jiàn)許多膜內(nèi)粒子，E面則較少。一般認(rèn)為膜內(nèi)粒子是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中的向前蛋白顆粒的圖像。膜內(nèi)粒子的數(shù)量與分布隨膜的功能狀態(tài)而變化，因此冷凍蝕刻復(fù)型技術(shù)適用于生物膜內(nèi)部結(jié)構(gòu)與功能的研究。
細(xì)胞冷凍蝕刻復(fù)型主要步驟
冷凍 將樣品組織浸入冷凍保護(hù)劑中，然后再將樣品放入液氮(-196攝氏度)內(nèi)快速冷凍。
斷裂 在真空條件下使樣品斷裂，斷裂面常為組織、細(xì)胞的薄弱部位，如細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層的疏水極之間。
蝕刻 在真空內(nèi)使溫度回升到-100攝氏度，使斷裂面含游離水較多之處的冰晶生化，形成凹凸不平的"浮雕"效果。
復(fù)型 在斷裂面上先后噴鍍鉑和碳，形成金屬?gòu)?fù)型膜稱復(fù)型(replica)，用次氯酸鈉等腐蝕夜將組織溶解，取復(fù)型膜在透射電鏡下觀察。
