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抗體相關基本知識
2021-1-7 閱讀(2476)
一、抗體的基本結構
經x線晶體衍射結構分析發現，抗體Ig由四條多肽鏈組成，各肽鏈之間由數量不等的鏈間二硫鍵連接。Ig可形成“Y”字型結構，稱為Ig單體，是構成抗體的基本單位。
（一）重鏈和輕鏈
二、抗體的制備流程
1. 蛋白類抗原：對于天然易獲取的蛋白可以純化后直接作為免疫原；對于天然含量較少或難以提取的蛋白，可以通過基因工程重組表達的方式獲取。同時也可以選擇蛋白的特定的連續片段做多肽合成作為抗原，較短的多肽是半抗原，通常免疫原性較弱，需要進一步偶聯載體蛋白(可選KLH、BSA、OVA)才能作為免疫原。
2. 小分子化合物：化合物抗原同樣是半抗原，也需要進一步偶聯載體蛋白才能作為免疫原。為了便于偶聯載體蛋白，特定的化合物還需要進行分子改造以便能成功偶聯。
3. 病原體：滅活的病毒或細菌可以直接作為免疫原。
抗原
是一類在適合條件下能激發機體免疫系統發生免疫應答，并能與免疫應答產生的效應物質（抗體和效應細胞）在體內或體外發生特異性結合反應的物質。
抗原決定簇(antigenic determinant)
指抗原上那部分可以引起機體產生抗體的具有特殊立體構型和免疫活性的分子結構和化學基團，叫做抗原決定簇。由于抗原決定簇通常位于抗原分子表面，因而又被稱為表位(epitope)。
•構象決定簇(conformational determinants): 又稱為不連續決定簇(discontinuous determinants)，是抗原中由分子基團間特定的空間構象構成的決定簇，一般是由分子中不連續的若干肽鏈盤繞折疊而構成。
（二）抗體的克隆性(Clonity)
一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇，因而使機體產生好幾種不同的抗體，終產生出抗體是漿細胞。只針對一個抗原決定簇起作用的B細胞群或漿細胞群就是一個純系，純系的英文為Clone，音譯就是克隆。由一種B細胞群或漿細胞克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合，就象導，彈 ，精，確地命中目標一樣。另一方面，即使是同一種抗原刺激機體，也存在多種抗原決定簇，相應地就產生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體。
（三）抗體的純化
我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體，血清蛋白以及其他各種雜蛋白等，在制備特異性抗體過程中當抗體的效價達到實驗預期之后，需要對免疫血清進行純化提取得到效價更高，特異性更強，穩定性更好的抗體。
目前，大多數商品化抗體使用Protein A或Protein G進行純化。由于protein A或protein G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結合。Protein A或protein G 作為配基可以被偶聯到瓊脂糖凝膠上，當抗血清從中流過時，特異性的IgG就與配基結合，其他雜蛋白則穿流而過。因兩種蛋白純化抗體時對不同宿主的抗體的結合能力不同，我們需要具體情況，分別選擇protein A 或protein G, 或者是protein A/protein G組合。一般兔抗（包括單克隆蛋白與多克隆抗體）、小鼠單抗IgG2a、IgG2b、IgG3, 選擇用protein A純化；而小鼠、大鼠和山羊的多克隆抗體、小鼠單抗IgG1、大鼠單抗，則選擇用protein G純化。
