Cas13a核酸酶（又名C2c2）是VI型CRISPR-Cas系統(tǒng)效應(yīng)蛋白，具有RNA介導(dǎo)的RNA內(nèi)切酶活性。在靶標(biāo)單鏈RNA存在PFS序列的情況下，可特異性地切割靶標(biāo)RNA。此外，Cas13a還具有依賴于靶標(biāo)單鏈RNA的反式切割活性（即旁路切割活性），可用于開(kāi)發(fā)靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)試劑盒。

本公司開(kāi)發(fā)的Cas13a Nuclease源自Leptotrichia wadei(Lwa) 細(xì)菌，采用大腸桿菌重組表達(dá)，純度超過(guò)95%，既可以用于體外RNA切割，體外RNA檢測(cè)，也可用于活細(xì)胞RNA的調(diào)控、RNA基因編輯，同時(shí)也可以用于光學(xué)探針生物學(xué)標(biāo)記。Cas13a在體外與crRNA穩(wěn)定結(jié)合，將Cas13a/crRNA（或者crRNA質(zhì)粒）轉(zhuǎn)入細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)RNA的編輯，Cas13a/crRNA也可以被靶RNA激活，從而實(shí)現(xiàn)體外高靈敏度的RNA檢測(cè)。

使用建議：

1) 建議全程在冰上配制體系。

2) 為了保證反應(yīng)的正常進(jìn)行，需使用高質(zhì)量的RNA模板。

3) 使用RNase Free的耗材（離心管、槍頭等）。

產(chǎn)品說(shuō)明：

1) 蛋白分子量為140kDa

140ng/μl = 1pmol/μl

2) crRNA設(shè)計(jì)

可以根據(jù)如下說(shuō)明設(shè)計(jì)LwaCas13a Nuclease 的crRNA。其序列為5’-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3’

其中，5’-Direct Repeat region (長(zhǎng)度36nt，直接重復(fù)區(qū)，紅色字體) + Spacer region(長(zhǎng)度25-35nt，靶標(biāo)結(jié)合區(qū)，灰色區(qū)域)-3’。

注：Cas13a切割靶標(biāo)ssRNA需要特定5’-A/U/C-3’的PFS（protospacer flanking sequence）。

保存溫度：

-70℃保存。

產(chǎn)品包裝 ：

保存體系：

500mM NaCl，20mM sodium acetate，0.1mM EDTA，1mM TCEP，50% (v/v) Glycerol，pH6.0，at 25℃。

質(zhì)量保證：

經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶，純度達(dá)95%；內(nèi)毒素含量< 100EU/mg；qPCR方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌基因組殘留；無(wú)RNase、核酸內(nèi)、外切酶污染。

切割體系（20μl）：

在冰水浴上混合以下體系：

37 ℃每30-60s收集一次熒光，80-99cycles。