QuickShuttle-BHK-21 細胞轉染試劑（BHK-21 細胞用）

 貨號：KX0110046  含量：0.8 ml 

用途：用于 BHK-21 細胞的瞬時轉染和穩定細胞系構建（立傳立轉）。 

注意事項：

1. 質粒 DNA：請用能夠去除內毒素的方法制備高質量的質粒 DNA。 

2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。 

3. 培養基：經過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規培養基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉染效果不理想可嘗試其它培養基。 

4. 以 24 孔細胞板轉染實驗為例，推薦每孔低內毒素質粒 DNA 用量為 2µg、轉染試劑用量為 3~5µl，請 在正式實驗前根據不同培養基用報告基因進行優化。 

5. 立傳立轉要求使用生長旺盛的細胞，即細胞生長至 80-90%成片或剛長滿。若使用生長過老的細胞， 將明顯影響立傳立轉的效率。 

6. 立傳立轉對細胞狀態要求較高，如果轉染效果不理想，可按 QuickShuttle-Enhanced 的轉染方法，在細胞貼壁后進行標準轉染操作。 

使用方法 

1. 將新鮮消化的 BHK-21 細胞接種到 24 孔細胞板中，每孔 1~2×105細胞，1ml 培養基。

備注：可在 生長旺盛的細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉染，無需 18~24 小時的等候時間。 

2. 將 2μg 質粒 DNA 和 3~5μl 轉染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。

備注：質粒 DNA 和轉染試劑的量需要根據不同培養基來優化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。 

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。 

4. 將上述復合物直接加入到細胞培養基中，用加樣器吸打混勻。

備注：轉染復合物可直接加入含血清的細胞培養基中進行轉染。 

5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養。

備注：無需在轉染后 4~6 小時補加血清或更換培養基。 

6. 24~72 小時后根據實驗需要進行瞬時表達分析或穩定細胞系加壓篩選。