1,原理：
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。
目前應用zui多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（elisa），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進行的抗原抗體反應均在載體表面進行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔）上，然后加被測溶液，倘樣品中有相應抗原，則與抗體在載體表面形成復合物。洗滌后加入酶標記的特異性抗體，后者通過抗原也結合到載體的表面。洗去過剩的標記抗體，加入酶的底物，在一定時間內經酶催化產生的有色產物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀察或分光光度計測定。
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附于載體上，然后加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成復合物。洗滌后加酶標記的抗球蛋白（抗抗體）與之反應。洗滌后加底物顯色，有色產物的量與抗體的量成正比。
常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP），相應的底物分別是鄰苯二胺（OPD）和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應為棕黃色，后者為藍色。可用目測定性，也可用酶標儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量。
2，ELISA的類型：
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：
（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；
（2）酶標記的抗原或抗體，稱為"結合物"（conjugate）；
（3）酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。
用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型：
2.1雙抗體夾心法測抗原：雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。2） 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。3） 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。
2.2 雙抗原夾心法測抗體: 反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。
2.3 間接法測抗體： 間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體（抗抗體）以檢測與固相抗原結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。加酶標抗抗體。可
用酶標抗人Ig以檢測總抗體，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。4）加底物顯色 2.4 競爭法測抗體：當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可采用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然后加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌后再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般采用此法。
2.5 競爭法測抗原：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
2.6 捕獲包被法測抗體： IgM抗體的檢測用于傳染病的早期診斷中。間接法ELISA一般僅適用于檢測總抗體或IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體，因標本中一般同時存在較高濃度的IgG抗體，后者將競爭結合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結合到固相上。因此如用抗人IgM作為二抗，間接測定IgM抗體，必須先將標本用A蛋白或抗IgG抗體處理，以除去IgG的干擾。在臨床檢驗中測定抗體IgM時多采用捕獲包被法。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的早期診斷。類風濕因子（RF）同樣能干擾捕獲包被法測定IgM抗體，導致假陽性反應。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞，用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。