摘要：從雄性初斷乳SD大鼠肝勻漿中提取肝刺激因子(HSS)并加以部分純化, 觀察其促人肝癌細胞增殖活性及對p21ras蛋白表達的影響。結果表明: (1) HSS具有明顯的促人肝癌細胞增殖活性, 其分子量為14～20 kD; (2) HSS可提高p21ras蛋白表達, 具有時間-效應關系, 并與EGF呈協同作用; (3)HSS調節p21ras蛋白表達具有劑量-效應關系, 且呈現出飽和性。鑒于我們已報道HSS上調EGF受體蛋白和基因表達這一事實, 本實驗結果進一步說明, HSS促人肝癌肝細胞增殖與其調節EGF受體介導的信號分子傳導過程相關。

關鍵詞：肝刺激因子；p21ras；肝臟再生

Abstract:The hepatic stimulator substance (HSS) was partially purified from schedule-lighted weanling rat livers. The effects of HSS on p21ras expression of human hepatic carcinoma cell BEL-7402 were examined. The results showed: (1) HSS was capable of promoting the proliferation of the cells, and its molecular weight was 14～20 kD; (2) the p21ras expression was increased under HSS effect time-dependently, and the effect of HSS appeared synergistic with EGF; (3) the p21ras expression induced by HSS manifested a dose-dependent manner, and the saturation effect of HSS occurred at the concentration of 100 μg/ml. Considering together with our previous report about HSS regulation on EGF receptor, these results strongly suggest that the proliferatory effect of HSS on hepatic carcinoma cells is presumedly related with EGF receptor-mediated signal transduction.

Key words:hepatic stimulator substance; p21ras; liver regeneration

肝臟具有強大的再生能力。肝再生是在多因素參與下有序的調節過程［1～3］。表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子α(TGF-α)、肝細胞生長因子(HGF)、胰島素等均具有顯著的促進肝細胞增殖的作用。然而, 這些生長因子不具有組織特異性, 因此僅從這些因子出發難以闡明肝再生調節的分子機制。LaBrecque于1975年首先從初斷乳大鼠肝中提取肝再生刺激因子(hepatic regenerative stimulatory substance, HRSS［4］, 后稱HSS), 繼而研究了HSS的理化特征［5～8］。 HSS可刺激肝細胞DNA合成, 促進肝細胞由G1期進入S期［9］; 穩定細胞膜, 減輕CCl4和半乳糖胺對肝細胞的毒性作用［10,11］。體外研究證明, HSS確為人胎肝細胞基因表達產物［12］。盡管人們一直努力將HSS制成純品［7, 13］,但未見成功報道。鑒于HSS能增強EGF促肝細胞增殖活性, 近年來也有人將HSS稱之為肝再生增強因子(augmentor of liver regeneration, ALR)［14］。HSS是否與已克隆出的ALR同為一體, 尚不能zui終定論。 我們曾報道, HSS促肝細胞增殖活性與EGF受體表達相關［15,16］。為研究HSS對EGF受體介導下游信號傳導的調節作用, 本實驗觀察了HSS對人肝癌細胞系BEL-7402 p21ras表達的影響, 以進一步探討HSS作用的可能機制。

1.材料和方法

1.1 實驗動物[17] 雄性初斷乳SD大鼠(60～90 g), 節律光照飼養1周(7∶00～19∶00光照, 19∶00～次日7∶00避光), 自由飲食。

1.2 HSS的提取及部分純化［18］將上述SD大鼠于第8日7∶00～9∶00之間斷頸處死, 剖腹摘取肝臟, 制備HSS。將HSS濃縮(CT60, 丹麥Heto生產)至2 ml, 經Sephadex-G75(Superfine, 瑞典Pharmacia公司)層析, 流動相為DPBS(pH7.4), 洗脫速度為35 ml/h。以分光光度計(Lamda-Bio, 美國PE公司)測定流分體積的吸光值(OD280), 并以此為橫坐標, OD280為縱坐標繪制蛋白的分離色譜圖。