大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J實驗結果計數和細胞培養操作步驟

【資料簡介】

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J    實驗結果計數：

（1）將血球計數板及蓋片擦干凈，并將蓋片蓋在計數板上。

（2）將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數板之間。

（3）靜置3分鐘。

（4）鏡下觀察，計算計數板四大格細胞總數，壓線細胞只計左側和上方的，然后按下式計算：

     細胞數/ml=4大格細胞總數/4*10000

注意：鏡下偶見由兩個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算，若細胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J       細胞培養操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量，使的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。